产品货号:
BTN13-99047
中文名称:
川贝母鉴定试剂盒(PCR电泳法)
英文名称:
Bulbus Fritillariae cirrhosaer PCR Kit
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是基于常规PCR技术开发的专门用于川贝母研究检测的试剂盒。
保存:-20℃,有效期2年。
一、样品DNA的制备
二、设置PCR反应
三、电泳检测
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川贝母(Fritillariae Cirrhosae Bulbus)是百合科贝母属的川贝母、甘肃贝母、暗紫贝母、瓦布贝母、梭砂贝母和太白贝母6种贝母的干燥鳞茎,有化痰止咳、清热润肺、散结消痈之功效。由于川贝母的药用价值高、疗效显著、市场需求量大,故常有用5种其他贝母(如浙贝母、平贝母、伊贝母、湖北贝母等)混充川贝母的现象。目前川贝母鉴最常且最准确的由2015年版《中国药典》收录的PCR-RFLP法,该法需要PCR后再进行酶切电泳分析,操作繁琐。
- 即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
- 产品经过精心优化,分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
- 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
- 特异性高,引物是根据川贝母DNA高度保守区设计,in silico分析发现它只能检测川贝母,不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
- 本制品足够50次20μL体系的常规PCR反应。
- 本制品只能用于定性实验,不能用于定量实验。
- 本制品只能用于科研。
组分 | 规格 |
2×PCR MasterMix | 500μL |
超纯水 | 1mL |
川贝母PCR引物干粉 | 50T |
川贝母PCR阳性对照(1×104拷贝/μL) | 250μL |
保存:-20℃,有效期2年。
- 为避免扩散传染性病原,本制品不提供活体样品做阳性对照,只提供专一的DNA片段作为阳性对照。
- 引物干粉在使用前需要短暂离心,然后在离心管中加入110μL的超纯水充分混匀后再使用,未用完的需要-20℃保存。
一、样品DNA的制备
- 如果有N个样品,必须设置N+2个提取反应,多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照(1×104拷贝/μL,本试剂盒提供)10μL加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样)。可以直接用水作为制备的阴性对照。
- 用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。
二、设置PCR反应
- 标记N+4个PCR管,其中N+2个用于上步得到的DNA样品,额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照,另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分:
成分 N+2个
样品管PCR
阴性对照PCR
阳性对照2×PCR MasterMix 各10μL 10μL 10μL 川贝母PCR引物混合液 各2μL 2μL 2μL N+2个样品DNA模板 各8μL - - PCR阴性对照(水) - 8μL - 川贝母PCR阳性对照(1×104拷贝/μL) - - 8μL - 按下表设置PCR反应:
过程 温度 时间 预变性 95℃ 5min PCR反应
(35个循环)95℃ 45sec 54℃ 45sec 72℃ 30sec 最后延伸 72℃ 10min
三、电泳检测
- 取10μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳,检测扩增效果,由于扩增产物较短,建议用1.5%的琼脂糖凝胶。
- 阳性样品预期得到的扩增产物长度为230bp。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或PCR阴性对照)有此扩增产物,说明环境污染,则整个实验无效,不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物,则说明有系统性的问题(试剂,设备,程序,操作等),需要重复并排查原因。
- 如果没有上述两种情况,则实验有效,可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性,无则判定为阴性。
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